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兔溶菌酶檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作小竅門

發(fā)布時(shí)間: 2022-10-22  點(diǎn)擊次數(shù): 850次
  兔溶菌酶檢測(cè)試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中牛孕酮(P)水平。用純化的牛孕酮(P)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入孕酮(P),再與HRP標(biāo)記的孕酮(P)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的孕酮(P)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中牛孕酮(P)濃度。
  兔溶菌酶檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作小竅門:
  1、加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
  2、合理安排檢測(cè)量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。
  3、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
  4、要盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,又能反映出試劑盒的精密度。
  5、樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
  6、為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
  7、未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,請(qǐng)于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液。
  8、ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中,加樣后及時(shí)放人孵箱,標(biāo)本較多時(shí),要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間,防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。
  9、剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5、0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
  10、人ELISA試劑盒洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
  11、每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
  12、手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15~30s,不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
  13、對(duì)樣本的結(jié)果有疑問時(shí)需要使用其他檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證。
  14、沒有去離子水或雙蒸水時(shí),可以使用娃哈哈純凈水配制溶液,切勿使用自來水。
  15、在使用微量加樣器時(shí),吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
  16、吸取液體時(shí)速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,人ELISA試劑盒吸取的量不夠準(zhǔn)確。
  17、吸取液體時(shí)要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸,減少誤差。
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